Esses tampões podem ser usados para aplicações biológicas em pH próximo ao neutro
Os três valores de pKa para o ácido fosfórico (do CRC Handbook of Chemistry and Physics) são 2,16, 7,21 e 12,32. O fosfato monossódico e sua base conjugada, o fosfato dissódico, são geralmente usados para gerar buffers de valores de pH por volta de 7, para aplicações biológicas, como mostrado aqui.
Fazer este buffer é um pouco mais difícil do que fazer buffers TAE e TBE. Não é extremamente difícil, no entanto. Simplesmente média. Deve demorar cerca de 10 minutos para preparar esse buffer. Veja como.
1. Decida sobre as propriedades do buffer
Antes de fazer um buffer, você deve primeiro saber qual molaridade você quer que seja, que volume fazer e qual é o pH desejado. A maioria dos tampões funciona melhor em concentrações entre 0,1 M e 10 M. O pH deve estar dentro de 1 unidade de pH do ácido / base conjugado pKa. Por simplicidade, este cálculo de amostra será para 1 litro de buffer.
2. Determinar a proporção de ácido para base
Use a equação de Henderson-Hasselbalch (abaixo) para determinar que proporção de ácido para base é necessária para fazer um tampão do pH desejado. Use o valor de pKa mais próximo do seu pH desejado e a relação se referirá ao par conjugado ácido-base que corresponde a esse pKa.
Equação HH: pH = pKa + log ([Base] / [Ácido])
Para um buffer de pH 6,9, [Base] / [Ácido] = 0,4898
Substitua por [Ácido] e Resolva por [Base]
A molaridade desejada do buffer é a soma de [Acid] + [Base].
Para um buffer de 1 M, [Base] + [Ácido] = 1 e [Base] = 1 - [Ácido]
Ao substituir isso na equação da razão, da etapa 2, você obtém:
[Ácido] = 0,6712 moles / l
Resolva para [Ácido]
Usando a equação: [Base] = 1 - [Ácido], você pode calcular que:
[Base] = 0,3288 moles / l
3. Misture a Base Ácida e Conjugada
Depois de usar a equação de Henderson-Hasselbalch para calcular que proporção de ácido para base é necessária para o seu tampão, prepare apenas 1 litro de solução usando as quantidades corretas de fosfato monossódico e fosfato dissódico.
4. Verifique o pH
Use uma sonda de pH para confirmar que o pH correto para o buffer é atingido. Ajuste ligeiramente conforme necessário, usando ácido fosfórico ou hidróxido de sódio (NaOH).
5. Corrigir o volume
Uma vez que o pH desejado é atingido, traga o volume do buffer para 1 litro. Em seguida, dilua o buffer como desejado. Esse mesmo buffer pode ser diluído para criar buffers de 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M ou qualquer coisa entre eles.
6. Dicas para o buffer
Lembre-se de que pKa não é facilmente medido para um valor exato. Valores ligeiramente diferentes podem estar disponíveis na literatura de diferentes fontes.
7. O que você precisa
Para fazer o buffer, você precisará de três substâncias, enquanto os materiais restantes são equipamentos. As substâncias são fosfato monossódico, fosfato dissódico e ácido fosfórico ou hidróxido de sódio para ajustar o pH.
Você também precisará de um medidor de pH, sonda e material de laboratório apropriado. Isso inclui um balão volumétrico, cilindros graduados, béqueres e barras de agitação.
Por fim, você precisará de uma placa quente.