Este tampão é usado para estudar o movimento do DNA
Esse buffer tem baixa força iônica e baixa capacidade de buffer. É mais adequado para eletroforese de grandes pedaços de DNA (> 20 kb) e precisará ser substituído com freqüência ou recirculado por tempos de funcionamento do gel mais longos (> 4 h).
Com isso em mente, você pode querer considerar vários lotes do buffer.
Dado que o buffer é fácil de fazer e as etapas podem ser executadas rapidamente, fazer mais de um lote de cada vez não deve ser muito demorado ou difícil de realizar. Usando as instruções abaixo, deve levar apenas 30 minutos para fazer o buffer TAE. Veja como:
Prepare uma Solução Estoque de EDTA
Uma solução de EDTA (ácido etilenodiamino tetracético) é preparada antes do tempo. O EDTA não irá completamente para uma solução até que o pH seja ajustado para cerca de 8,0. Para uma solução-mãe de 500 mililitros de EDTA 0,5 M, pesar 93,05 gramas de sal dissódico de EDTA (FW = 372,2). Dissolver em 400 ml de água desionizada e ajustar o pH com hidróxido de sódio (NaOH). Complete a solução para um volume final de 500 mililitros.
Chicote de uma solução estoque de TAE
Fazer uma solução stock concentrada (50x) de TAE pesando 242 gramas de base Tris (FW = 121,14) e dissolvendo-a em aproximadamente 750 mililitros de água desionizada.
Cuidadosamente adicionar 57,1 mililitros de ácido glacial e 100 mililitros de 0,5 M EDTA (pH 8,0). Depois disso, ajuste a solução para um volume final de 1 litro. Esta solução estoque pode ser armazenada à temperatura ambiente. O pH deste buffer não é ajustado e deve ser de cerca de 8,5.
Prepare uma solução de trabalho do TAE
A solução de trabalho de 1x tampão TAE é feita simplesmente diluindo a solução estoque em 50x em água desionizada.
As concentrações finais de soluto são 40 mM. Tris-acetato e 1 mM de EDTA. O buffer está agora pronto para uso na execução de um gel de agarose.
O que você precisa para o buffer
Como fazer o buffer TAE requer apenas um conjunto rápido e simples de instruções, o número de materiais necessários não é excessivo. Você só precisa de sal dissódico de EDTA, Tris base e ácido acético glacial.
Fazer o buffer também requer um medidor de pH e padrões de calibração, conforme apropriado. Você também precisará de béqueres ou frascos de 600 mililitros e 1500 mililitros, além de cilindros graduados. Finalmente, você precisará de água deionizada, agitar as barras e mexer nas placas.
Empacotando
Onde você planeja fazer o buffer - em um site da escola, em um local de trabalho ou em outro local, como sua casa? Verifique o inventário antes de começar a certificar-se de que você tenha todos os materiais acima para o buffer TAE.
Se você preferir não ter que pagar por materiais, é recomendável optar por fazer o buffer fora de sua casa. Você pode encomendar facilmente os materiais necessários on-line ou visitar uma loja especializada para eles.