Este tampão é usado para a separação eletroforética do DNA
O tampão TBE é particularmente útil para a separação de fragmentos de ADN mais pequenos (PM <1000), tais como pequenos produtos de digestão com enzimas de restrição .
O TBE tem uma capacidade de buffer maior e fornecerá uma resolução mais nítida do que o buffer TAE . O tampão TAE é uma solução constituída por Tris base, ácido acético e EDTA (Tris-acetato-EDTA).
A TBE é geralmente mais cara do que a TAE e inibe a DNA ligase, o que pode causar problemas se as próximas etapas de purificação e ligação forem planejadas. Com os três passos simples a seguir, aprenda como fazer o buffer TBE. Não deve demorar mais de 30 minutos para criar esse buffer. Veja como:
Prepare uma Solução Estoque de EDTA
Uma solução de EDTA (ácido etilenodiamino tetraacético) deve ser preparada antes do tempo. O EDTA não irá completamente para a solução até que o pH seja ajustado para cerca de 8,0. Para uma solução-mãe de 500 mililitros de EDTA 0,5 M, pesar 93,05 gramas de sal dissódico de EDTA (FW = 372,2). Em seguida, dissolvê-lo em 400 mililitros de água desionizada e ajustar o pH com NaOH. Depois disso, complete a solução para um volume final de 500 mililitros.
Prepare uma solução de estoque de TBE
Fazer uma solução concentrada (5x) de TBE pesando 54 g de Tris base (FW = 121,14) e 27,5 g de ácido bórico (FW = 61,83) e dissolvendo ambos em aproximadamente 900 mililitros de água desionizada. Em seguida, adicione 20 mililitros de EDTA 0,5 M (pH 8,0) e ajuste a solução para um volume final de 1 litro.
Esta solução pode ser armazenada à temperatura ambiente, mas um precipitado se formará em soluções antigas. Armazene o tampão em garrafas de vidro e descarte se um precipitado tiver se formado.
Prepare uma solução de trabalho de TBE
Para eletroforese em gel de agarose, um tampão TBE pode ser usado em uma concentração de 0,5x (diluição 1:10 do estoque concentrado). Dilua a solução estoque em 10x em água desionizada. As concentrações finais de soluto são Tris-borato 45 mM e EDTA 1 mM. O buffer está agora pronto para uso na execução de um gel de agarose .
O que você precisa
Para fazer o tampão TBE, você precisará de apenas quatro substâncias. Os itens restantes nesta lista são equipamentos. As quatro substâncias necessárias são o sal dissódico de EDTA, Tris base, ácido bórico e água desionizada.
Quanto ao equipamento, você precisará de um medidor de pH e padrões de calibração, conforme apropriado. Além disso, você precisará de béqueres ou frascos de 600 mililitros e 1500 mililitros. Completando as suas necessidades de equipamentos são graduados cilindros e agitar barras e agitar placas.
Verifique o inventário no laboratório que você usará para garantir que você tenha tudo de que precisa antes de começar. Nada é pior do que ter que parar no meio de preparar uma solução porque você ficou sem os materiais adequados.
Se o seu laboratório estiver na escola ou no seu local de trabalho, verifique com o pessoal adequado para ver se eles têm todos os itens do estoque. Fazer isso pode economizar tempo e energia no final.