Como fazer este tampão de coloração imuno-histoquímica
Solução salina tamponada com fosfato (PBS) é uma solução tampão que é comumente usada para coloração imuno-histoquímica (IHC) e é frequentemente usada em pesquisas biológicas. PBS é uma solução salina à base de água contendo hidrogenofosfato de sódio, cloreto de sódio e, em alguns casos, cloreto de potássio e di-hidrogenofosfato de potássio.
Coloração imuno-histoquímica
Imuno-histoquímica refere-se ao processo de detecção de antígenos, como proteínas nas células de uma seção de tecido, usando o princípio da ligação de anticorpos especificamente a antígenos em tecidos biológicos.
A coloração por imunofluorescência foi o primeiro método de coloração imuno-histoquímica.
Os antígenos tornam-se visíveis quando conjugados com anticorpos usando corantes de fluorescência devido a uma reação de ligação antígeno-anticorpo. Esse processo ocorre quando é ativado por luz excitante de um comprimento de onda específico sob um microscópio fluorescente.
A osmolaridade e as concentrações de íons das soluções combinam com as do corpo humano - elas são isotônicas.
Uma receita para a PBS
Você pode preparar o PBS de várias maneiras. Existem várias fórmulas. Alguns deles não contêm potássio, enquanto outros contêm cálcio ou magnésio .
Esta receita é relativamente fácil. É para solução estoque 10X PBS (0,1M). No entanto, você também pode criar uma solução de estoque 1X ou começar com essa receita de 10X e diluí-la para 1X.
Todo o processo leva cerca de 10 minutos.
Uma opção para adicionar Tween também é fornecida.
O que você precisa para fazer o buffer PBS
- Fosfato de sódio monobásico (anidro)
- Fosfato de sódio dibásico (anidro)
- Cloreto de sódio
- Escala e pesagem de barcos
- Agitador magnético e barra de agitação
- Uma sonda de pH calibrada e soluções adequadas para ajustar o pH
- Balão volumétrico de 1L
- Tween 20 (opcional)
Como fazer solução salina tamponada com fosfato (PBS)
Pesar 10,9 g de fosfato de sódio anidro dibásico (Na2HPO4), 3,2 g de fosfato de sódio anidro monobásico (NaH2PO4) e 90 g de cloreto de sódio (NaCl).
Dissolva em pouco menos de 1 L de água destilada.
Ajuste o pH para 7,4 e faça a solução até um volume final de 1L.
Dilua 10X antes de usar e reajuste o pH, se necessário.
Você pode fazer uma solução de PBS contendo 0,5% de Tween 20 adicionando 5mL de Tween 20 à solução de 1L.
Dicas para fazer o buffer PBS
Armazene o buffer à temperatura ambiente após ter feito a solução PBS.
Reagentes não-anidros podem ser substituídos, mas você terá que recalcular a massa apropriada de cada um para acomodar as moléculas de água adicionadas.
Usos da solução salina tamponada com fosfato (PBS)
A solução salina tamponada com fosfato tem muitos usos porque é isotônica e não tóxica para a maioria das células. Pode ser usado para diluir substâncias e é frequentemente usado para lavar recipientes de células. O PBS pode ser usado como um diluente em vários métodos para secar biomoléculas, porque as moléculas de água dentro dele serão estruturadas em torno da substância - proteína, por exemplo. Será "seco" e imobilizado em uma superfície sólida.
O pH permanece estável e consistente para evitar a destruição das células.
A película fina de água que se liga à substância evita a desnaturação ou outras alterações conformacionais. Os tampões de carbonato podem ser usados para o mesmo propósito, mas com menos eficácia.
O PBS também pode ser usado para obter um espectro de referência ao medir a adsorção de proteínas em elipsometria.