O tampão citrato de sódio é utilizado para o isolamento do RNA, pois minimiza a hidrólise básica das fitas de RNA. Isso faz com que seja um passo importante na purificação do mRNA durante a pesquisa genômica ou para estudar a transcrição.
Os tampões à base de citrato também podem auxiliar na detecção de antígenos em preparações teciduais fixas, pois quebram as ligações cruzadas formadas entre os antígenos e o meio de fixação.
Com o guia abaixo, faça um tampão de citrato de sódio de pH 6. As instruções não são apenas fáceis, mas rápidas de executar também. Você deve levar apenas cerca de 10 minutos para concluir essas etapas.
Duas opções para fazer o buffer
Existem duas maneiras de fazer um tampão de citrato de sódio. Primeiro, determine se você tem tanto ácido cítrico quanto a base conjugada, citrato de sódio, para trabalhar. Se você só tem ácido cítrico, não é um problema. Você ainda pode fazer o buffer.
Por outro lado, se você tiver o ácido e a base, crie uma solução de estoque de cada um. Misture 21 gramas de ácido cítrico em 1 litro de água destilada e 29,4 gramas de citrato de sódio em 1 litro de água destilada.
Se você tiver apenas ácido cítrico, misture 2,1 gramas em pouco menos de 1 litro de água destilada e prossiga para a próxima etapa.
Misturando Soluções de Ácido Cítrico e Citrato de Sódio
Agora que você criou sua solução de estoque (se você tivesse um ácido e uma base) ou misturou seu ácido em água destilada (se não tiver), você pode se concentrar em suas soluções.
Misture 82 mililitros da solução de ácido cítrico com 18 mililitros da solução de citrato de sódio.
Em seguida, faça o volume total da mistura até pouco menos de 1 litro com água destilada. Deixe volume suficiente para permitir a adição de hidróxido de sódio (NaOH) no próximo passo.
Ajustando o pH
Agitando suavemente a solução usando um agitador magnético, use hidróxido de sódio 1M para ajustar o pH da mistura para 6,0. Depois disso, faça o volume final da solução até 1 litro com água destilada usando um balão volumétrico.
O que você precisa para fazer o buffer
Não só não vai demorar muito para fazer o tampão de citrato de sódio, você também não vai precisar de muitos materiais para isso. Com ácido cítrico, 1M de hidróxido de sódio, água destilada e uma sonda de pH calibrada, você estará no meio do caminho. O uso de citrato de sódio é opcional.
Fazer o tampão também exigirá um cilindro graduado de 1 litro, um frasco volumétrico de 1 litro e três frascos de mídia de 1 litro. Por fim, você precisará de uma barra magnética e um agitador magnético.
Se você não tiver todos esses materiais, considere usar o laboratório em sua escola ou site de trabalho, para não precisar comprá-los sozinho. Você também pode comprar facilmente esses materiais on-line ou visitar uma loja de produtos especializados em sua área.