Como liofilizar uma cultura bacteriana (liofilização)

Liofilização, ou liofilização, é um procedimento laboratorial curto

A liofilização, ou liofilização , é o processo de remover a água de um produto depois de congelado (e depois colocado sob vácuo) permitindo que o gelo mude de um sólido para um vapor, sem passar por uma fase líquida. Gelo (ou outros solventes congelados) são removidos de um produto através do processo de sublimação e moléculas de água ligadas são removidas através do processo de dessorção.

O básico da liofilização

Uma das melhores maneiras de armazenar uma cultura bacteriana, fúngica, de levedura ou de outro microrganismo por longos períodos de tempo é usar o processo de liofilização. Este procedimento de laboratório curto pode ser realizado com qualquer liofilizador comercialmente disponível que preservará sua coleção de culturas. Como a liofilização é a forma mais complexa e cara de secagem, o processo é geralmente restrito a materiais delicados sensíveis ao calor e de alto valor. Substâncias que não são danificadas pelo congelamento geralmente podem ser liofilizadas para que o armazenamento refrigerado seja desnecessário.

Esse processo pode levar menos de três horas e até 24 horas, sem incluir o tempo de crescimento da cultura.

O processo passo a passo da liofilização

1. Primeiro, cultive durante a noite uma cultura, ou gramado, do microrganismo em LB ou outra placa de ágar nutriente apropriada.

2. Em seguida, prepare frascos estéreis de crimpagem em autoclave com antecedência, com as tampas (tampas de borracha) posicionadas frouxamente na parte superior. Coloque etiquetas de papel impressas com a identificação da cultura dentro dos tubos antes da autoclavagem. Como alternativa, use tubos com tampas projetados para esterilidade .

1. Adicione 4 mL de tampão de liofilização à placa. Se necessário, as células podem ser suspensas usando uma vareta de vidro estéril.

2. Transfira rapidamente a suspensão de cultura para os frascos esterilizados. Adicione aproximadamente 1,5 mL por frasco. Vede com a tampa de borracha.

3. Congele a suspensão de cultura dentro dos frascos colocando os frascos num congelador de -20 graus Celcius.

1. Depois que as culturas estiverem congeladas, prepare o liofilizador, ligando-o e dando tempo para que as condições adequadas de temperatura e vácuo se estabilizem. Faça isso de acordo com as instruções do fabricante para a marca específica de liofilizador que você está usando.

2. Cuidadosamente e assepticamente, coloque as tampas dos frascos ligeiramente por cima dos frascos, de modo a que a humidade possa escapar durante o processo de liofilização e coloque os frascos numa câmara de secagem por congelação. Aplique o vácuo na câmara de acordo com as instruções do fabricante.

3. Permita que o tempo de cultura seja completamente liofilizado (secar). Isso pode levar de algumas horas até a noite, dependendo do volume de cada amostra e de quantas amostras você tem.

4. Retire as amostras da câmara de secagem por congelação de acordo com as instruções do fabricante e sele imediatamente os frascos com as tampas de borracha e depois os topos de crimpagem.

5. Armazene a coleção de cultura liofilizada à temperatura ambiente.

Produtos que você precisa

• Liofilizador
• Nutrientes ou outras placas de ágar adequadas (e incubadora para cultivar cultura)
• Haste de vidro
• Tampão de liofilização
• Frascos com tampa de crimpagem com tampas de borracha (e um crimper para aplicar as tampas)
• Congelador

<sub>Referência:

SP Scientific. Princípios Básicos de Liofilização. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>