Também referida como Análise RFLP, a técnica aproveita os polimorfismos nos códigos genéticos de pessoas individuais. Embora todos os membros de uma espécie tenham essencialmente a mesma composição genética, essas pequenas diferenças são responsáveis por variações no fenótipo, como aparência ou metabolismo, entre indivíduos.
RFLP: Técnica de Análise e Aplicações
A técnica de análise RFLP envolve o corte de uma determinada região do DNA com variabilidade conhecida, com enzimas de restrição, separando os fragmentos de DNA por eletroforese em gel de agarose e determinando o número de fragmentos e tamanhos relativos.
Uma enzima de restrição é uma enzima, uma molécula de proteína, que corta o DNA em locais de restrição. Em essência, a amostra de DNA é quebrada e digerida pelas enzimas de restrição. Os fragmentos resultantes são separados de acordo com seus comprimentos e o padrão dos tamanhos dos fragmentos será diferente para cada indivíduo testado.
O processo completo de RFLP requer rotulagem de sonda, fragmentação de DNA, eletroforese, blotting, hibridação, lavagem e auto-radiografia. O RFLP detectado é visualizado usando filme de raios X em uma autorradiografia, onde os fragmentos de DNA podem ser visualizados e analisados após serem separados um do outro por eletroforese.
Algumas das aplicações para análise de RFLP incluem:
- DNA fingerprinting . Cientistas forenses podem usar a análise RFLP para identificar suspeitos com base em amostras de evidências coletadas em cenas de crimes.
- Paternidade. O RFLP também é usado na determinação da paternidade ou para rastrear ancestralidade.
- Diversidade genética. A técnica pode ser usada no estudo da evolução e migração da vida selvagem, estudando padrões de reprodução em populações de animais e na detecção e diagnóstico de certas doenças.
A técnica de usar a detecção de variações no genoma por RFLP é uma ferramenta vital no mapeamento do genoma e na análise de doenças genéticas. Se a localização de um determinado gene da doença está sendo procurada em um determinado cromossomo, então os pesquisadores analisariam o DNA de membros de uma família com a doença, e então procurariam por padrões semelhantes de herança nos alelos do RFLP.
Uma vez localizado o gene da doença, a análise de RFLP em outros membros da família pode revelar um portador dos genes mutantes ou sinalizar um risco geral de doença. É importante notar que a técnica de RFLP não é amplamente usada agora que técnicas mais novas e mais robustas são usadas para análise de DNA na ciência forense e em vários outros campos.
Aspecto Negativo da Análise
Infelizmente, a técnica de análise de RFLP é tediosa e lenta. Além de exigir uma grande quantidade de amostra de DNA - a amostra usualmente precisaria ser do tamanho de um quarto, o que é relativamente grande para amostras de DNA - o processo, desde a rotulagem da sonda até a lavagem e autorradiografia, pode levar até um mês completo para concluir.
Os resultados do Projeto Genoma Humano praticamente substituíram a necessidade de RFLP. O projeto permitiu determinar toda a seqüência do DNA encontrado nas células humanas, o genoma humano e identificar todos os genes do genoma humano.